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HPLC

Responsables

Lic. Natalia Lazzarini,

Lic. Romina Forte Nerán,

Dra. Andrea Costantino

LIUC

 

Principios de la técnica
La cromatografía liquida es un método de separación química ampliamente usado, basado en la interacción entre solutos, una fase móvil, liquida y una fase estacionaria, solida. La fase móvil liquida es bombeada a través de una columna cilíndrica, rellena con un adsorbente sólido, particulado (fase estacionaria). Una cantidad pequeña de muestra liquida conteniendo múltiples constituyentes es inyectada en la fase móvil, a la entrada de la columna. A medida que la fase móvil lava la muestra a través de la columna, los componentes individuales se separan entre sí, sobre la base de sus afinidades por el adsorbente sólido y la fase móvil. Cada constituyente emerge de la salida de la columna a un tiempo característico después de la inyección. Ese tiempo es más largo para aquellos constituyentes con una mayor afinidad por la fase estacionaria. El tiempo es más corto para los constituyentes con una mayor afinidad por la fase móvil. A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.

Esta técnica presenta distintas propiedades, como:
- Es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto peso molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentra disponible para la selectividad, en adición a una fase estacionaria activa.
- Ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor gama de estas interacciones selectivas y más posibilidades para la separación.

Específicamente, este equipo, permite la separación, cuantificación e identificación de constituyentes de una mezcla mediante un inyector manual y un detector de matriz de fotodiodos. El detector de matriz de fotodiodos 2998 de Waters permite una detección óptica avanzada y ofrece una detección y cuantificación sin precedentes de impurezas traza conjuntamente con la capacidad de realizar análisis espectrales. Es el detector ideal para cualquier aplicación del laboratorio, desde la identificación de compuestos hasta el desarrollo de métodos. A la hora de efectuar análisis de rutina, el detector de matriz de fotodiodos 2998 es fiable y fácil de usar. Un control mejorado del software ofrece flexibilidad durante el funcionamiento 2D y 3D.

Instrumental

HPLC-PDA
Sistema cromatográfico HPLC Waters 600E conformado por un inyector manual
Rheodyne 7725i, una Bomba Binaria, Detector PDA 2998.

HPLC-MS
LC Thermo Scientific - UltiMate 3000-MSQ PLUS.
Cuenta con:
- módulo inyector automático.
- detector de longitud de onda variable 190-600nm
MSQ PLUS
Simple cuadrupolo
Modo de ionización: ESI, APCI
Cambio de polaridad positiva o negativa
Selección de voltaje de fragmentación variable
SIM/SCAN
Rango de masas: 10 a 2000 m/z +/- 0.13 amu modo scan
Velocidad de barrido de masas 2500 uma/s en modo estándar y 5250 uma/s en modo
rápido.

Aplicaciones
- Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos
- Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos, ácidos orgánicos
- Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos
- Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos, propulsores, colorantes
- Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
- Química forense: Drogas, venenos, narcóticos
- Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrógenos.

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